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乳腺癌HER-2检测的概况与进展与乳腺早期检测诊断方法*

2020-5-8 14:58:38      点击:

乳腺癌HER-2检测的概况与进展与乳腺早期检测诊断方法*

摘要人类表皮生长因子受体-2(HER-2/neu)是乳腺癌重要的预后和HER-2靶向药物治疗的预测指标,准确检测乳腺癌 患者的HER-2状态对临床诊疗具有重要意义。目前美国临床肿瘤学会(ASC0)和美国病理医师学会(CAP)推荐免疫组织化学 (IHC)、荧光原位杂交(FISH)和亮视野原位杂交(BISH)3种HER-2检测方法。虽存在各自的优势和不足,但在少数情况下仍无 法检测部分患者HER-2的状态。银增强原位杂交(SISH)、多重连接探针扩增技术(MLPA)、定量逆转录聚合酶链反应 (Q-RT-PCR)和RNA原位杂交(RNA-ISH)等新的检测方法也不断应用到HER-2检测中,因其自身的独特优势,满足了部分患者 的HER-2检测需求,因而有很好的临床应用前景。本文将对这些技术的特点及其优势和存在的不足进行综述。

关键词人类表皮生长因子受体-2 HER-2/neu检测乳腺癌 doi:10.3969/j.issn,1000-8179.20140377

人类表皮生长因子受体-2(HER-2/neu)基因是 定位于染色体17ql2 ~ 21上的原癌基因,在20% ~ 30%被确诊的乳腺癌患者中存在HER-2基因扩增或 蛋白过表达情况[1]。HER-2阳性的乳腺癌患者往往 表现为肿瘤恶性程度高、治疗效果及预后较差,但其 对使用特异的HER-2靶向药物治疗效果较好。因 此,准确地检测乳腺癌患者的HER-2状态对于临床 进行个体化治疗和评估预后至关重要[2]。近年,乳腺 癌组织中HER-2状态检测的应用技术越来越多。大 致分为:1 )HER-2蛋白水平的检测,如免疫组织化学 (IHC) ;2)HER-2基因DNA水平的检测,如荧光原位

杂交(FISH)、亮视野原位杂交(BISH)、多重连接探针 扩增技术(MLPA)等;3) HER-2转录水平的检测,如 定量逆转录聚合酶链反应(Q-RT-PCR)、RNA原位杂 交(RNA-ISH)等。本文将对这些技术的特点进行介 绍,并对其优势和存在的不足进行综述。

1乳腺癌HER-2检测的现状

目前国内外乳腺癌HER-2检测最常用的方法为 IHC和FISH[3]。IHC是一项广泛而实用的技术,具有 检测成本低、操作简单、耗时短、可实现自动化检测 和染色后切片便于存档等优点,阅片时可同时进行 组织形态学评价,已成为乳腺癌患者检测HER-2扩

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中国肿瘤临床 2014年第 41 卷第 10期 Chin J Clin Oncol 2014, Vol. 41,No. 10 www.cjco.cn

增初筛最常使用的方法U。FISH较IHC更特异、更准 确并且稳定性更高,尤其是双探针FISH在原来单一 的HER-2探针的基础上加人了 17号染色体着丝粒 探针(CEP17)作为内对照,已成为目前HER-2检测 的“金标准”[4]

IHC是一种半定量的方法,易受到受检组织固定 时间、固定液的选择、抗体试剂盒的选择和染色结果 判读的主观性等诸多因素的影响[5],因此准确性和稳 定性差于FISH。但FISH作为一门专业技术,其操作 步骤和设备远比IHC更复杂,而且还有信号判读时缺 乏组织形态学参考及染色后的切片不宜长时间保存 等不足[6_7]。另外FISH的准确性还受17号染色体异 倍体及肿瘤异质性等因素的影响[u],亦存在少数病 例因标本较少或前期处理不当而无法进行FISH检测 或多次检测结果均为临界值,无助于临床治疗。对 于FISH无法确定HER-2状态的标本应积极选择其 他方法(如PCR、RN A-ISH等)进行检测。

2乳腺癌HER-2检测的新进展

2.1   BISH

BISH是近十几年来出现的HER-2基因检测的 新技术,主要包括显色原位杂交技术(CISH)、银增强 原位杂交(SISH)等方法。2013年10月ASC0/CAP发 布了乳腺癌HER-2检测指南,将BISH列为乳腺癌 HER-2检测的新技术[1]

2.1.1 CISH CISH由用来首先报道检测 HER-2基因扩增,主要原理是使用地高辛或生物素 标记的探针在癌组织切片上进行杂交反应,显色后 在普通光学显微镜下观察HER-2信号的方法。

CISH是一种定量的HER-2检测方法,与IHC相 比CISH特异性更强、准确性和稳定性更高[7]。CISH 与FISH相比,CISH独特的优势在于可以在普通光学 显微镜下观察HER-2基因信号,并能同时进行组织 学评价,另外CISH操作步骤和设备较简单,染色后的 切片信号稳定,便于长期存档[6]。CISH分为单、双探 针CISH。单探针CISH仅含有HER-2基因探针,信 号单一且空间分辨率较低,可能会造成HER-2基因 低度扩增病例被漏诊,当HER-2基因低度扩增的信 号数与无扩增的信号数相接近时,亦容易造成误 判。另外,单探针CISH缺乏CEP17作为内对照,无法 排除单色探针可能造成的假阴性(17号染色体单体) 或假阳性(17号染色体多体)。双探针CISH在 HER-2探针(绿色信号)的基础上加人CEP17号探针 (红色信号)作为内对照,通过计算绿/红色信号的比 值来表示HER-2基因状态,从而很好的解决了上述 的问题[1°]。单、双探针CISH的评分标准均可参照 ASCO/C AP指南中原位杂交(ISH)的标准Jacquemier

:11]通过分析多中心的乳腺癌HER-2检测结果,发 现CISH和FISH总一致性为98%。因此CISH适合在 无FISH检测条件的实验室使用[12]

2.1.2         SISH SISH用于HER-2基因扩增检测,主要 是利用酶促反应原理促进银离子沉积并凝固到 HER-2基因的靶位点而产生精确的显色信号,对显 色信号分析后获得HER-2基因状态的方法[1°]。虽与 CISH有一些共同优点,如SISH可在普通光学显微镜 下判读HER-2基因信号、同时可进行组织学评价、染 色后的切片信号稳定亦便于长期保存等,但较CISH 准确度更高、耗时更少[7,13]。SISH与FISH相比较,操 作步骤简单易掌握,可实现全程自动化检测,6 h内可 获得检测结果[6],符合临床快速诊断的要求。并且评 分标准完全可以参照ASCO/CAP的评分标准[14]。 SISH分为单、双探针SISH。单探针SISH的缺点类似 于单探针CISH,双探针SISH引人CEP17探针作内对 照,已被FDA批准用于HER-2检测。据相关文献报道, SISH检测HER-2基因状态与FISH的符合率达87% ~ 97%[14_15]。因此SISH可能在未来成为乳腺癌HER-2 检测的常规方法。当然作为一种新技术SISH也有一 些不足,如检测成本较高、银染的HER-2基因信号为 黑色而内对照CEP17信号是红色造成信号对比不够 清晰[1°]

2.2   MLPA

MLPA的检测原理主要为使用荧光标记的探针 与HER-2基因的DNA进行杂交,之后通过连接、PCR 扩增,产物经毛细管电泳分离及数据收集,对收集的 数据使用软件进行分析后得出检测结果。该技术操 作简单并可实现自动化检测,还具有检测成本低廉、 耗时短、灵敏度高和特异性强等优点;6'16_171。特别适 合用来检测片段化的DNA样本,如中性福尔马林固 定石蜡包埋(FFPE)的肿瘤组织,并且少量标本便可 实现检测目的。在HER-2基因检测的同时,MLPA可 对17号染色体上不同区域的多个靶基因进行检测, 有利于17号染色体非整倍体的检测并获得不同区域 的靶基因异常扩增信息[7]。但是该技术也存在一些 缺点,如检测标本缺乏组织形态学的评价、DNA提取 中难免混有非浸润性癌组织的DNA、可能受到靶序 列或扩增产物的交叉污染等。Moelans等[16]发现ML- PA和FISH/CISH有很好的一致性,是一种可靠的 HER-2检测方法。因此对于组织较少无法进行 FISH/CISH检测或需同时检测17号染色体上多个基 因的乳腺癌病例可选择MLPA进行检测。

2.3   Q-RT-PCR

Q-RT-PCR在HER-2基因检测的原理是将HER-2 基因信使核糖核酸(mRNA)逆转录成互补DNA(cDNA)

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