中国汉族人群2型糖尿病早期筛查的研究与糖尿病早期无创检测诊断方法

2型糖尿病（type 2 diabetes, T2D)是一种极为普遍的流行性疾病，在我国患者 人数居世界首位。目前T2D的临床诊断主要通过糖化血红蛋白、空腹血糖和糖耐量 的相应指标来评估，但由于T2D早期发病的症状轻微而且这种诊断标准没有涉及发 病的本质原因，大部分糖尿病患者不能被尽早的发现和诊断，从而延误了预防和治 疗，加重病情。由于T2D是一种多基因遗传疾病，如果能将相关突变基因与个性化 分子检测相结合，对人群进行早期的基因筛查，将有可能显著地减少或者延缓糖尿 病的发生。本研究根据全基因组的筛查结果将检测11个与T2D患病高度相关的基 因，以期建立针对中国人的早期基因筛查模型。

方法：

1、 采用病例-对照的研究方法，所有受试者均来自无血缘关系的宁波地区汉族 人群。样本收集自2011年5月到2012年8月，对纳入研究的病例组及正常组进行 体格检查和临床生化指标的检测。

2、 查找全基因组关联研究（genome-wide association study, GWAS)或候选基因

法报道的T2D高风险致病基因，并结合国外已用于T2D筛查的单核苷酸多态（single nucleotide polymorohism, SNP)位点，确定研究11个与T2D高度相关的易感基因上的 SNP位点。

3、 采用全血基因组提取试剂盒提取受试者血液中的DNA,根据位点的序列设计 引物进行PCR，将PCR产物测序进行基因分型。

4、 数据分析：对计量资料采用单因素方差分析（ANOVA)进行正态性检验和 方差齐性检验，用Hardy-Weinberg平衡原理估测样本的群体代表性，对测序结果 应用软件Arlequin program (version 3.5)、CLUMP22和卡方检验比较病例-对照组 间的基因型频率分布、等位基因型频率分布、优势及劣势基因型的差异，并计 算出相应的卡方值（多)、比值比（OR)及95°%的可信区间5、 通过对中外数据库的检索，收集、整理针对中国人群的基因尤C#以的SNP

位点 rs2237892，基因 CDm/ 的 SNP 位点 rs7756992 和基因    的 SNP

位点rs10811661与T2D相关性的文献资料，

6、 采用Statasoftware11.0版本进行荟萃关联分析，用Egger’s线性回

归检验检测所收集资料是否存在发表偏倚。运用Dersimonian and Laird Q 检验来计算各研究之间的异质性大小。

结果：

1、 共纳入362名受试者，其中T2D病例组222例（男124例，女98例，平均 年龄52.6 ± 20.5岁），正常对照组140例（男61，女79，平均年龄59.4 ± 15.2 岁）。纳入研究的对照组及正常组在体质指数（bodymassindex，BMI)、TG、 CHOL、HDLC和LDLC方面存在显著差异。

2、 完成了 11个基因SNP位点的测序及基因分型：rs5219， rs1801282，

rs7903146，    rs4402960，    rs7756992，    rs13266634，   rs1111875，    rs4430796，

rs2237892， rs10010131，    rs10811661。

3、 通过对病例-对照组的测序结果进行Hardy-Weinberg遗传平衡定律的检验， 发现所选样本的11个SNP位点中基因见的SNP位点rs13266634和基 因TTF7Z2的SNP位点rs7903146不具有群体代表性（尸<0.001)，其余基 因的SNP位点均具有群体代表性CP>0.05)。

4、 通过对病例-对照组的测序结果进行基因型频率的分布趋势比较，发现基因 尤的SNP位点rs2237892，基因的SNP位点rs7756992和基因

的SNP位点rs10811661的基因型分布趋势在T2D病例和对照组中有显 著性差异（尸<0.05)，是T2D发病的风险基因；在对年龄、性别及BMI进行校 正后，三个位点与T2D的相关性仍然显著。基因尤d/厂的SNP位点rs5219经过 年龄、性别、BMI校正后，该位点呈现与T2D的发病相关性（尸=

[1]  034 )。尸尸的 SNP 位点 rs1801282，/GF2RP2 的 SNP 位点 rs4402960， 丑丑EX的SNP位点rs1111875,丑^7卢上的SNP位点rs4430796，灰F幻的SNP

[2]  位点rs10010131的基因型和等位基因频率分布在T2D病例和对照组中无显著性 差异CP>0.05),与中国汉族人群的T2D发病无关。

[3]  5、 病例-对照组的等位基因频率的比较中显示中国人群中携带rs2237892的C 等位基因、rs7756992的G等位基因、rs10811661的T等位基因会使T2D的发病风 险增加扣2237892 0尺(95%0):1.45 (1-2.08)，^7756992 0尺（95%匸1):1.6(1.19- 2.17), rs10811661 0R(95%CI) : 1.32 (0.98-1.79))。

[4]  6、   在荟萃分析部分，筛选针对中国人群中，基因尤的SNP位点 rs2237892与T2D患病相关的文章共有14篇，包括20562例病例和18565例对照； 基因CD兄4Z/的SNP位点rs7756992与T2D患病相关的文章，共有8篇，包括 14512例病例和16280例对照；基因CD尤#25的SNP位点rs10811661与T2D患 病相关的文章，共8篇，包括10291例病例和11309例对照。

[5]  7、 对以上文献资料进行发表偏倚评估、异质性检验和统计学分析，发现各位点 收集的相关资料发表偏倚小、存在异质性，合并后的总OR值及95%可信区间进一 步说明了中国人群中携带rs2237892的C等位基因、rs7756992的G等位基因、 rs10811661的T等位基因会使T2D的发病风险增加（rs2237892OR= 1.32, 95% CI = 1.24 - 1.41, P < 0.0001 ； rs7756992OR = 1.23, 95% CI = 1.19 - 1.27, P < 0.0001 ； rs10811661OR= 1.24, 95% CI = 1.16 -1.33, P <0.0001)。

[6]  结论：

[7]  首先，中国宁波地区人群中基因尤的SNP位点rs2237892，基因 CD尤AL/ 的 SNP 位点 rs7756992 和基因  的 SNP 位点 rs10811661 与

[8]  T2D相关。其次，通过荟萃关联分析证实了中国人群中携带rs2237892的C等位基 因、rs7756992的G等位基因、rs10811661的T等位基因会使T2D的发病风险增 加。最后SNP位点rs2237892，  rs7756992和rs10811661可作为重要的中国人群

[9]  T2D风险预测生物标记。

[10]     关键词：2型糖尿病，早期基因筛查，单核苷酸多态性，荟萃分析

成都华西华科研究所研发生产多种糖尿病及并发症早期无创检测诊断系统

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