成都华西华科研究所研发生产定量CT QCT骨密度体模软件分析系统

维生素 D 免疫与QCT骨密度体模软件检测方法

  维生素D的非钙作用

维生素D活性代谢物是钙、磷和骨代谢的调节激索， 这是维生素D的主要生理功能。随蒋研究的深入，特别 是维生索D受体发现以后，人们不仅在小肠、肾和成骨细 胞等与钙、磷和骨代谢直接相关的器官和组织找到了维 生索D受体，而且在甲状旁腺、淋巴细胞、胸腺、前髄细 胞，甚至胰腺、卵巢、胎盘等部位也发现r维生索D受体。 这些结果提醒人们，除了钙、磷和骨代谢这一传统认识之 外，维生索D—定还具有更广泛的生理功能，因此20址 纪80年代以来，维生索D的廿:钙作用逐渐成为一个里 要的研究方向。

前髄细胞中发现维生素D受体，使维生索D对细胞 增殖和分化的研究得到重视，从而开始了维生素D在癌 症治疗中的应用；维生素D对甲状旁腺功能的调节作 用，使1,25(0HM)₃及其类似物成为治疗透析病人继发 甲旁亢的重要手段；维生素D与胰腺功能、皮肤代谢、生 殖和胚胎发育之间的关系亦受到广泛的重视。在维生索 D的非钙研究趋势中.最受甫视的领域就是维生素丨）与 免疫功能的关系。

  维生素D免疫学的三个重要发展

维生索D与免疫系统关系的研究，已经取得了许多重要发展，发衣了数里相当可观的维生素D激素免疫学 作用原理的论文，并已有许多综述，特别是美国两院院 士 Deluca教授的两篇评述，系统地总结了维生素D与免 疫系统研究的现状和发展前景。维生素D与免疫学关系 的研究日臻完#，已经形成f维生素D免疫学。诸多学 者认为，维生索D治疗很可能发展成一种新的自身免疫 性疾病的新疗法。美国专利局已经接到许多有关申请， 有些已经被批准。

在维生素D免疫学形成过程中，有三个取要的发展 阶段：在细胞水平上发现维生京D与免疫相关，即发现 免疫细胞存在维生素D受体和活化的巨噬细胞可以将 25(OH)D₃羟化为l，25(OH)₂D,_;在整体动物身Jh证明 维屮素D缺乏和药理剂里的维生素U激索抑制T细胞 调节免疫；用维生索D激素预防和治疗自身免疫性疾病， 及预防和抑制器官移植排斥反应。

1.在细胞水平上发现维生素D与免疫相关在免 疫细胞发现维生索D受体：丨983年Manolagas实验室的 Prowedini等人在“Science”报道，人类正常外周血单核白 细胞存在丨，25(OH)₂R受体大分子。静止的正常外周 血T细胞不存在该受体，但经有丝分裂剂棺物血凝素 (Phytohemaglutinin, PHA)或刀豆球蛋白 A (Concanaval- in. Con A)活化后则发现了维生素D受体。阁中的沉降 系数标准足_: C(糜蛋白酶兀，chymotrypsinogen)S = 2. 5; CXova丨bumin,卵白蛋白）S=3.7。1,25(OH>jD₃ 受体， S=3.3。此外，在培养的恶性B和T淋巴细胞系，及人 类非B和非T细胞中也找到了维生索D受体。同年 Bhalla等人也报导，人类外周血单核细胞有商亲合力的

l,25(OH)₂D»受体，解离常数Kd = 0.丨4nM, M大结合 Nmax为每mg蛋白质34fmd,相当于每个中核细胞 1350受体分子。而活化T淋巴细胞的1,25(OH)₂Dj受 体，Kd = 0.10nM，Nmax=100fmol/m(?,相当于每个 T 淋巴细胞1500受体分子。该文也指出，静止的人外周血 T淋巴细胞没有该受体，以植物血凝素（PHA)活化后， 则具有l，25(OH)₂D,受体。此前，Peacock等人在人单 核细胞样细胞系U937和克隆人T淋巴细胞已发现了高 亲合力的l,25(OH)₂D，受体，，综t所述，免疫系统的 单核细胞和巨噬细胞可以直接表达1，25(()H)₂D₃受体， 而淋巴细胞在表达该受体之前霱要以抗质或促细胞有丝 分裂剂活化。对淋巴细胞群的分类研究证明，CD8+淋巴 细胞有最高浓度的维生素D受体，而CD4’淋巴细胞和 巨咮细胞次之，但仍然有显著高的含贵。

活化的巨噬细胞可以产生l,25(OH)₂〇3_: Adams等 人在1983〜1986年间连续发表论文，证明培养的肉状 瘤肺泡 S 哩细胞（pulmonary a丨veolar macrophages, PAM) 可以将25(OH>D₃羟化为l,25(OH)₂D;,从而找到了肺 肉状瘤患者高血浆l，25(OH)₂D₅的原因，也解释了该病 患#的尚钙血症现象。结节病（sarcoidosis〉是原因不明的 泛发性肉芽肿型网状细胞增多症。这是肾外可以合成 l,25(OH)₂D₃的苜次报进，更重要的是它从另一个方面 提示，维生索D激素与免疫系统存在着关联。这一羟化 过稈为地寒米松（Dexamethasone，DEXA)所抑制，而为于 扰索（IFN)所刺激。

这一阶段的工作，在指出维生素D激索与免疫系统 密切相关的同时，也向人们提出一个问題：维生家D对免 疫系统到底苻什么影响？

2.从整体动物证明维生索D缺乏和药理剂里的 l,25(OH)₂D;抑制T细胞调节免疫细胞水平的研究结 果表明，维生素D与免疫系统有密切的关联.但离体的细 胞培养和建立的细胞系.毕竟与整体动物不同，它推除了 体内各种M杂的调控因子和反馈系统的相互作用。因 此，只有在整体动物身上做严格的实验，才能确定维生素 D对免疫系统到底有何种作用。

维生素D的作用可以从两个方面着手：维生素D缺 乏和维生素D过鱼。维生素D缺乏的动物模羽是很难 得到的，0•先，正常情况下动物可利用紫外线自身合成 维生素D,其次是脂溶性的维生素D极易污染，笫三是在 一般食物内都含有维生素D。因此需要黄光环境下饲以 去维生索D的纯化营养索配制的饲料，经两代繁殖才能 得到理想的维生素D缺乏小鼠。Yang等人完成了这一 模咽，并且观察了该鼠（D)对致敏剂二硝基氟苯（Dini- trofluorebenzene，DNFB)的延迟型超敏反应。皮肤接触 的延迟甩超敏反应是测定细胞调节免疫反应的精典 方法。

(1) 6个DNFB敏化组的耳厚比值均比对照组 (A/O:丙酮/撤揽油，acetone/olive oi丨，1 : 1) ；K 著的高（F < 0.001),证明DNFB敏化法是测定细胞调节免疫反应的灵敏方法。

(2)    -D敏化组的比值较正常组（Normal)和+丨）组 明显低（P<〇.001),证明维生索D缺乏降低了小鼠的延 迟超敏反应，即损伤了小鼠的细胞调节免疫。

(3)    -D组和-D+D组（-D10周后给维生索D3 周），DNFB敏化的比值基本相同（P>0.8),且均较正常 组和+ 0组明显低（/⁵ = /<0.001),证明_0组接受3周 维生素D后，虽然血钙和25(OH)D已恢复正常，但小鼠 的延迟超敏反应并不能立即恢复。

(4)    -D(或+ D)13周后给正常饲料8周，称-D + P组（或+ D+P组）。它们的比值无M著差异，无论对照 组（P>0.2)，还是敏化组（F>0.8)。表明给维生索U8 周后，-D组损伤的细胞调节免疫才得以恢复.实验还 表明，从DNFB敏化的维生索D缺乏小鼠胸腺得到的淋 巴细胞数明M减少，经刀豆球蛋白A (Con A)处理后，³H 胸腺嘧啶的渗人明显降低，而刺激指数（Stimulation In­dex, SI) 也明显降低。这些结果证明， 维生索 D 缺乏损伤 了小鼠的细胞渊节免疫。

继而，Yang等人又观察了药理剂笛1,25(01^03 和它的类似物19-_n〇r-丨，25(OH)₂D₃对正常小鼠免疫 反应的影响。腹腔连续注射7天1,25(0丨丨)iDjUOng/ 天）或 19- nor - 1,25(014)202 (lOOng/天），再隔日注射 到第17天后，以DNFB敏化，结果小鼠胸腺淋巴细胞数 明显减少，增殖被抑制，DNFB敏化组的剌激指数（SI〉降 低。血蓝蛋白（hemocyanin)特异的免疫球蛋白IgG,和 IgG,则显著降低。上述两项工作指出，整体动物的T细 胞凋传免疫是受l,25(OH)₂D₃调节的^维生素D缺乏 和过量都会抑制T细胞调节免疫，从而以整体动物实验 证明维生素D娃一种免疫调节剂，主要是T细胞调节免 疫抑制剂。当然维生素D缺乏和过贵所产生的细胞调节 免疫抑制的机制比较复杂。已知l,25(OH)₂D;与其受 体的结合同胸腺淋巴细胞的活性呈正相关，口服la- OH-D₃可防止大鼠胸腺的退化。因此当维生索D缺乏 时，T淋巴细胞的增殖和活性都会受到影响。甚至可能 引起免疫系统发存问題。给维生素D三周不能立即恢复 细胞调节免疫，就是一种提示。

这一结果使人们自然地想到，作为T细胞调节免疫 抑制剂的维生素D,将会对许多细胞调节免疫相关的疾 病产生作用。因此，Deluca等学者认为这是维生素D与 免疫系统关系研究中的一个重要进展。成都华西华科研究所研发生产QCT定量CT骨密度体模软件分析系统  
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