骨吸收标志物与QCT骨密度软件体模检测
成都华西华科研究所分析骨吸收标志物与QCT骨密度软件体模检测
骨重吸收标志物
多数骨电吸收标志物都是骨胶顷的代谢产物，怛也 有非胶原蛋白标志物如涎蛋白和抗酒石酸酸性磷酸酶 (tartrate - resistant acid phosphatase,TRACP)^?〇
1. 抗酒石酸酸性磷酸稱
[16] 理化特性及生理作用血中由钟、前列腺、红细 胞等来源的酸性磷酸酶共冇6种同工酶，在电泳时显示6 条泳带，骨源性（还包括肺泡细胞、巨噬细胞、脾K等来 源）酸性磷酸酶在第5泳带，洒石酸对大部分酸性璘酸酴 有抑制作用，但第5泳带除外，它能够抵抗酒石酸的抑 制，故称之为抗酒石酸酸性磷酸解。骨源性TRACP分 子质量32k/!，酶的活性中心含两个铁原子,TRAP可由破 骨细胞合成并直接分泌人血，因而柃测血淸TRACP的 活性能够反映破骨细胞状况。
[17] 检测方法检测TRAP常用的方法为对硝基苯 磷酸盐法，以酒石酸钠作为抑制剂，4-硝基苯磷酸钠为 底物，通过酶动力法或电泳法测定，特异性不理想，易受 血淸的一些抑制因子影响，也易受溶血的影响。最新发 展的单克隆抗体免疫测定法（R丨A或EUSA)明昆的提高 了特异性和敏感性，该方法是从人骨中提取TRACP免 疫动物产生抗体而建立起来的。TRACP以5a、5b两个
亚单体存在，其中只有TRACP-5b显示有成#细胞的 特性，TRACP-5a主要来源于血小板和其它组织。最近 巳有报告提出TRACP- 5b的免疫检测方法，初步的临 床实验结果显示该指标可用于成骨细胞活性的评价u1。 血淸中TRAP离于血浆，由凝血后血小板释放TRACP 入血淸所致。
2. I型胶原吡啶交联物及末端肽
[32] 理化特性及生理作用近十年来，I型胶原降解 时产生的吡啶交联物及末端肽作为骨吸收指标备受关 注，丨铟胶原吡啶交联物是在丨型胶原纤维的两个分子各 自的N-端子肽通过羟赖氨酰或赖贫酰-3-羟吡啶环 与另一胶原分子的930位氨基酸所在的螵旋处交联 (N - terminal telopeptide of type I col丨agen，NTX)，或各自 的末端多肽，通过上述吡啶环与另一胶原分子的87位氨 基酸所在的採旋处交联（C - terminal telopeptide of iype 1 col丨agen，CTX),这种结构增加了胶原纤维的稳定性，而当 胶原分子降解时，使产生分子大小各异的游离吡啶交联 物（吡啶啉pryidinoline, PYD,或称羟赖氨酰吡啶啉 hydroxy lysylpryidinoline，HP;脱氧批陡琳，deoxypryidi- noline，DPI)或叫赖第醜批陡咐 lysy丨pryidinoline，LP)或 与末垧肽结合的吡啶交联物（NTX, CTX)。其中PYD 是软骨、骨、韧带和血管中成熟胶原的主要成分，DPD则 只存在丁骨和牙本质屮，占成熟胶睁的21%。吡啶交联 物是I型胶原和J沏胶质分解的标志物，〇口〇是骨的特 异标志物。结合型交联物的分子质番一般都小于2kM, 和游离塑一起，都易于被肾脏淸除，尿中和DPD 40%以游离形式存在，60%以肽结合形式存在。
[33] 检测方法目前认为含交联部位的丨甩胶原末 站肽和吡啶交联物是评估骨重吸收圾好的指标％ ,起初 测定尿中总吡啶交联物采用纸层析或高压液相色谱法 (high - performance liquid chromatography, HPLC), ^ 能适应临床大s标本的测定，以后发展r放免法、酶联免 疫吸附法、直接免疫测定法，最近又有发光免疫法测定 DPD问世。
两种交联成分可通过反相离子配对HPLC(reverse - phase ion-paired HPLC)方法测定，其缺点也是不适应临 床大里标本测定。敏感的免疫测定法可用于测定尿和血 淸中的丨甩胶原端肽，其中包括：检测由组织金厲蛋白酶 产也的竣基末端丨型胶原端肽（carboxy - terminal type I collagen telopeptide generated by matrix metalloproteases, (：丁\-!^1^^,或称“丨(：1下”）的血淸放射免疫分析法，检测 来源于包括交联部位在内的丨勒胶原C端八肽（CTX- I，或称“〇058丨3{)8”）的儿种免疫分析法，以及检测1塱胶 原N端交联肽（NTX)的EL【SA法等^ CTX存在多种形 式，其大然的a形式含天冬氨酰基(aspany丨 >,其同分异构 的P形式含有异构的天冬氨酰（也称p天冬氨酰>，后者 在胶原成熟过程中产生，与胶原成熟相关的另一个过程 是天然的L形式消旋化产生D形式，目前免疫法对这四 种形式的CTX均可检测（此、《0、队、印)['如果没有特 别提示则一般检测的CTX-I为0形式⑴。用ELISA法
澜定尿NTX时，所检测的含〇2(丨）的N-端肽序列为 QyDGKGVG(K代表三价的吡啶交联物），这是破骨细胞 降解胶原的直接产物，由于〇2(1)链主要在骨胶原中，所 以这种测定的特异性较A ,而CTX的结构为所有组织中 的I铟胶原所共有，故与NTX相比，CTX作为骨吸收标 志物的特异性差些。有学者认为CTX-MMP在多发性 骨髄痛和代谢性骨病中是骨重吸收敏感的指标，在骨质 疏松则不是[5]。PYD和DPD的测定不受新合成的胶原 降解及饮食的影响，而且是骨骼组织高度特异的，故也是 反映#重吸收很好的代谢指标。PYD在其他组织中较 骨组织丰宮，相比之下DPD史具骨组织特异性。
1. 羟脯氨酸
3. 理化特性及生理作用 Hyp是胶职蛋内所特有 的氨基酸，占成熟胶厣总氨基酸组成的1096〜14%,胶 原降解时可释放出游离的Hyp和Hyp寡肽，游离Hyp绝 大部分通过肾小管蜇吸收，在肝脏分解为尿素，仅10% 含Hyp的短肽排泌至尿中，并多以二肽或三肽形式存在 (95%)，其余则是约5kM的肽，可能是由原胶原N端延 长肽产生，尿中Hyp 50%来自#。
4. 检测方法尿Hyp是骨吸收指标中应用历史M 长的，一般采用氣胺T氧化法。尿Hyp排泌呈柽夜节 律，峰值在早M。床Hyp受到饮食以及其他组织胶原降 解来源的影响，故缺乏特异性，囚此U前Hyp被认为是胶 原代谢的非特异性标志物，并已被更多特异性的标志物 所替代。
2. 羟赖氨酸榱苷
U)理化特性及生理作用（characters and physiological functions)羟赖袄酸糖苷是骨胶原的主体部分，存在两种 形式：葡萄糖背-半乳糖苷-经赖氣酸（glycosy丨-galactosyl - hydroxy 丨ysine, Glc - Gal - Hyl) 和半 乳糖苷 经赖氣 酸（galactosyl - hydroxy丨ysine，Gal - Hyl )，它们是胶原降 解产物的两种主要糖苷形式。人Gal-Hy丨主要在骨， Glc - Gal - Hyl主要在皮肤，皮肤中的Glc - Gal - Hyl / Gal-Hy丨为1.6:1,而骨中为丨：7,尿中的比例接近骨中 的比例，尿的总羟赖氨酸中，80%是糖苷形式。
[18] 检测方法这两种糖基化的羟赖氨酸不再被重 新利用和分解，W此是胶职降解很好的标志物，二者在胶 原代谢时释放入血循环并可通过HPLC在尿液中检测 到。用Gal-Hyl单克降抗体建立的检测方法，是反映骨 吸收较特异和灵敏的指标，与羟脯氨酸相比不受饮食干 扰，同时由于骨与软组织中两种糖苷的相对比例和总M 不同，尿HOLG可能是比尿Hyp更灵敏的测定骨吸收的 指标。尿Gal-Hy丨随年龄增加而增高。
3. 钙骨吸收时首先骨钙释放进人血循环，使血液 中钙浓度升高，进而经肾脏排泄，使床中钙浓度增高，由 于影响尿钙水平的因素较多，如饮食中钙、肠道吸收钙的 状况、肾功能状况等，以此测定尿钙缺乏特异性。
6 •骨涎蛋白（bone sialoprotein，BSP) BSP占骨非胶原 基质的5%〜10%,是活性成骨细胞和成牙本质细胞的 一种主要合成产物，在细胞-基质粘附过程及矿化组织
的细胞外基质超分子合成中起着重要作用。人们已建立 了检测血淸BSP的免疫分析方法，根据临床资料和注射 二膦酸盐治疗后血淸BSP水平迅速下降的现象，人们认 为血淸BSP主要反映与骨审吸收有关的过程，但目前尚 缺乏对这一新指标用于骨质疏松的评价。
[34] 组织蛋白酶L(cathepsin-U破骨细胞和其他一 些特殊的细胞，如巨噬细胞，可以分泌组织蛋白酶L的前 体，然后通过酸、表面活化或限制性蛋白水解等不同途径 产生具有酶活性的不同形式。组织蛋白酶L是一种溶酶 体肽链内切酶，胰于番木瓜半胱祆酸蛋白酶超家族（papain cysteine protease superfamily )，参与结缔组织 降解及 细胞外基质蛋白转换，在破骨细胞介导的骨重吸收中发 挥®要作用。Lang等165通过对32例骨质疏松、28例骨 最喊少、16例正常人血淸组织蛋白酶L的研究发现，骨 质疏松患者的组织蛋白酶L水平明显高于正常人，与 NTX水平显著相关（〃 =0.434，/?<0.0001)，推测该指标 有望成为新的骨代谢生化标志物。
彩响因素（Influential factors)
临床解释骨转化生化标志物，必须考虑到分析这些 标志物前已存在有哪些影响因素，这些因素大致可分为 两类：①不对控制的因索，如年龄、性别、绝经状态、疾病 或近期#折等，这些因素可通过使用适当的参考范围，或
特定参考范围适宜的个体校正，来解释测得的骨标志物 水平。②可控制因素，如24h生理节律、月经、或运动等， 可通过取标本的时间和状态的标准化来减小其影响。成都华西华科研究所分析研发定量CT QCT骨密度体模软件分析系统
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