一种治疗糖尿病的药物的质量检测方法与糖尿病早期无创检测诊断方法
成都华西华科研究所分析一种治疗糖尿病的药物的质量检测方法与糖尿病早期无创检测诊断方法
技术领域
本发明属于医药质量检测技术领域，涉及一种中成药的质量检测方 法，具体涉及一种治疗糖尿病的药物的质量检测方法。
背景技术
现有技术中，申请号,名称为“一种治疗糖尿病的 药物及其制备方法”的专利，公开了一种用于治疗糖尿病的药物及其制备 方法，由西洋参、黄芪、山药、地黄、山茱萸、枸杞子、麦冬、知母、天 花粉、五味子、五倍子、葛根等经过粉碎、提取浓缩、醇沉，减压干燥、 粉碎混合等工序制成的口服固体制剂。该产品具有益气养阴，健脾补肾之 功效，疗效显著、无毒副作用等特点。标准中以西洋参中人参皂苷Re为 定量检测指标，曾以高效液相色谱法进行含量测定，但是由于干扰过大， 无法操作，故采用双波长薄层色谱法测定治疗糖尿病的药物中人参皂苷Re 的含量，该方法具有灵敏、准确、重现性好等特点，作为控制该制剂质量 的含量测定方法。
发明内容
本发明的目的是为克服背景技术的不足，而提供一种操作简便，灵敏、 准确、重现性好，能够更有效的控制产品质量的治疗糖尿病的药物的质量 检测方法。
为了实现上述目的，本发明釆用的技术方案是：一种治疗糖尿病的药 物的质量检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
(1)取治疗糖尿病的药物4g,精密称定，置索氏提取器中，加乙醚 适量，加热回流1.5-2.5小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，加曱醇适量，
回流提取至无色，回收甲醇，残渣加水15-25mL使溶解，转移至分液漏斗 中，用水饱和正丁醇提取五次，用量依次为25mL、20mL、20mL、20mL 和15mL，合并提取液，用氨试液洗涤2-3次，每次用量15mL,弃去水层， 回收正丁醇至干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至10mL量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每 lmL含lmg黄芪甲苷的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸 取对照品溶液5^L,供试品溶液lO^L,分别点于同一硅胶G薄层板上，
以三氯曱烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，三氯甲烷、甲醇和水的体积百 分比为65: 35: 10,展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点 显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点；在紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；
[1] 取治疗糖尿病的药物4g，加甲醇20〜30mL,超声处理10〜15分 钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL溶解，作为供试品溶液；另取葛 根素对照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg葛根素的溶液，作为对照品溶 液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5fiL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水的下层溶液为展开剂，三氯甲烷、 乙酸乙酯、曱醇和水的体积百分比为15: 40: 22: 10,展开，取出，晾干 后用氨气熏半小时，在紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[2] 取治疗糖尿病的药物2g，加水20〜30mL,微热溶解，滤过，滤 液加盐酸lmL，加热回流50~70分钟，放冷，加三氯甲烷20〜30mL提取， 分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液；另 取菝葜皂苷元对照品，加甲醇制成每lmL含lmg菝葜皂苷元的溶液，作 为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20~30jiL，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-丙酮为展开剂，苯：丙酮的体积百分 比为9:1,展开，取出，晾干，喷以浓度8%香草醛无水乙醇溶液与硫酸 溶液的混合液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点；所述浓度8%香草醛无水乙醇溶液和硫 酸溶液的体积百分比为0.5 : 5;
[3] 取治疗糖尿病的药物4g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚
适量，加热回流1.5-2.5小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，加甲醇适量， 回流提取至无色，回收甲醇，残渣加水15-25mL使溶解，转移至分液漏斗 中，用水饱和正丁醇提取五次，用量依次为25mL、20mL、20mL、20mL 和15mL,合并提取液，用氨试液洗涤2-3次，每次用量15mL,弃去水层， 回收正丁醇至干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至10mL量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取西洋参对照药材lg，加水lmL, 浸润，再加水饱和的正丁醇10〜20mL,超声处理10-20分钟，滤过，回收 正丁醇至干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂 苷Rb!、Re和Rgp加甲醇制成每lmL各含lmg人参皂苷Rbp Re和 Rgi的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液和 对照品溶液各5^L、供试品溶液IOjiL,分别点于同一硅胶G薄层板上， 以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水的下层溶液为展开剂，三氯甲烷：乙酸乙 酯：甲醇：水的体积百分比为15 : 40 : 22 : 10,展开，取出，晾干，喷以 硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相 同颜色的斑点。
[4] 取治疗糖尿病的药物4g,精密称定，置索氏提取器中，加乙醚 适量，加热回流1.5-2.5小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，加甲醇适量， 回流提取至无色，回收甲醇，残渣加水15-25mL使溶解，转移至分液漏斗 中，用水饱和正丁醇提取五次，用量依次为25mL、20mL、20mL、20mL 和15mL,合并提取液，用氨试液洗涤2-3次，每次用量15mL，弃去水层， 回收正丁醇至干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至10mL量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取人参对照药材lg，加水lmL， 浸润，再加水饱和的正丁醇10~20mL,超声处理10-20分钟，滤过，回收 正丁醇至干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱 法试验，吸取供试品溶液IOjiL、对照药材溶液5jtL，分别点于同一硅肢G 薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水的下层溶液为展开剂，三氯甲 烷：乙酸乙酯：甲醇：水的体积百分比为15 : 40 : 22 : 10,展开，取出， 晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯 下检视；供试品色谱中，不得显与对照药材完全相一致的斑点；
[5] 取治疗糖尿病的药物3g,精密称定，加65-75%乙醇溶液 80-120mL,照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，浸出物不得少于 34.0%;
[6] 取治疗糖尿病的药物4g,精密称定，置索氏提取器中，加乙醚 适量，加热回流1.5-2.5小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，加甲醇适量， 回流提取至无色，回收甲醇，残渣加水15-25mL使溶解，转移至分液漏斗 中，用水饱和正丁醇提取五次，用量依次为25mL、20mL、20mL、20mL 和15mL，合并提取液，用氨试液洗涤2-3次，每次用量15mL,弃去水层， 回收正丁醇至干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至10mL量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re对照品，加甲醇 制成每lmL含0.5mg人参皂苷Re的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱 法试验，吸取供试品溶液10卟，对照品溶液4队、6吣，分别交叉点于同 一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，三氯甲烷： 甲醇：水的体积百分比为65: 35: 10,展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇 溶液，加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板， 周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长：^s=525nm，XR = 700nm， 测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
上述步骤（1)、（4)、（5)和（7)中所述硫酸乙醇溶液的浓度为10%。
上述步骤（1)、（2)、（4)、（5)和（7)中所述下层溶液为10°C以下 放置12小时的下层溶液。
上述步骤（1)、（3)、（4)、（5)和（7)中所述加热至斑点显色清晰中 的加热温度为105°C。
本发明与现有技术相比具有以下优点•.本发明通过薄层色谱法，实现 了对黄芪曱苷、葛根素、菝葜皂苷元、西洋参和人参皂苷Rbt、Re和Rgl 鉴别，同时采用双波长扫描法对人参皂苷Re含量的准确测定，方法操作 简便，准确先进，线性关系、重现性、精密度、稳定性、回收率均较好， 能够有效的控制产品的质量，保证产品疗效。
附图说明
图1为本发明中人参皂苷Re标准曲线示意图。
图中A-峰面积积分值，B-点样量（jig)。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明的保护范围不仅仅 限于以下实施例。
实施例
(一） 生产工艺
的处方量药材，西洋参粉碎，过80目筛； 其余药味加15倍量水浸泡4小时后，煎煮两次，第一次1.5小时，第二次 1小时，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.15 ~ 1.20 (80°C)的稠膏， 加乙醇使含醇量为60%,静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至 相对密度为1.15-1.20 (80°C)的浸膏，减压干燥，粉碎，过100目筛。 与上述西洋参药粉混合均匀，装肢囊，制成1000粒，即得。
(二） 质量检测方法
鉴别：（1)取治疗糖尿病的药物4g,精密称定，置索氏提取器中，加 乙醚适量，加热回流2小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，加甲醇适量， 回流提取至无色，回收甲醇，残渣加水20mL使溶解，转移至分液漏斗中， 用水饱和正丁醇提取五次，其用量依次为25mL、20mL、20mL、20mL 和15mL，合并提取液，用氨试液洗涤2次，每次用量15mL，弃去水层, 回收正丁醇至干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至10mL量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每 lmL含lmg黄芪曱苷的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸 取对照品溶液5^L,供试品溶液IOjiL，分别点于同一硅肢G薄层板上， 以三氯甲烷-甲醇-水l〇°C以下放置12小时的下层溶液为展开剂，三氯甲 烷、甲醇和水的体积百分比为65: 35: 10,展开，取出，晾干，喷以浓度 为10%的硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在 与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在紫外光灯下检视，显 相同颜色的荧光斑点；
[7] 取治疗糖尿病的药物4g,加甲醇20mL，超声处理10分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对
照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg葛根素的溶液，作为对照品溶液；照 薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5jtL，分别点于同一硅肢G薄层板 上，以三氯甲烷-乙酸乙醋-甲醇-水l〇°C以下放置12小时的下层溶液为展 开剂，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积百分比为15: 40: 22: 10, 展开，取出，晾干后用氨气熏半小时，在紫外光灯下检视•，供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[8] 取治疗糖尿病的药物2g，加水20mL,微热溶解，滤过，滤液 加盐酸lmL，加热回流60分钟，放冷，加三氯甲烷20mL提取，分取三 氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液；另取菝葜 皂苷元对照品，加甲醇制成每lmL含lmg菝葜皂苷元的溶液，作为对照 品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20〜30jiL，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以苯-丙酮为展开剂，苯、丙酮的体积百分比为9:1， 展开，取出，晾干，喷以浓度为8%的香草醛无水乙醇溶液与硫酸溶液的 混合液，105°C加热至斑点显色清晰，8%香草醛无水乙醇溶液和硫酸溶液 的体积百分比为0.5: 5;供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；
[9] 取治疗糖尿病的药物4g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚 适量，加热回流2小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，加甲醇适量，回流 提取至无色，回收甲醇，残渣加水20mL使溶解，转移至分液漏斗中，用 水饱和正丁醇提取五次，其用量依次为25mL、20mL、20mL、20mL和 15mL，合并提取液，用氨试液洗涤2次，每次用量为15mL,弃去水层， 回收正丁醇至干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至10mL量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取西洋参对照药材lg,加水lmL， 浸润，再加水饱和的正丁醇10mL，超声处理10分钟，滤过，回收正丁醇 至干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rbp Re和Rgi，加甲醇制成每lmL各含lmg人参車苷Rbp Re和Rgi的溶液， 作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液和对照品溶液各 5卟、供试品溶液10吣，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙 酸乙酯-甲醇-水10°C以下放置12小时的下层溶液为展开刺，三氯甲烷：乙 酸乙酯：甲醇：水的体积百分比为15 : 40 : 22 : 10,展开，取出，晾干，
[10] 喷以浓度为10%的硫酸乙醇溶液，105°c加热至斑点显色清晰，供试品色 谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[11] 检查：（5)取治疗糖尿病的药物4g,精密称定，置索氏提取器中，加 乙醚适量，加热回流2小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，加甲醇适量， 回流提取至无色，回收甲醇，残渣加水20mL使溶解，转移至分液漏斗中， 用水饱和正丁醇提取五次，其用量依次为25mL、20mL、20mL、20mL 和15mL,合并提取液，用氨试液洗涤2次，每次用量15mL，弃去水层， 回收正丁醇至干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至lOmL量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取人参对照药材lg,加水lmL， 浸润，再加水饱和的正丁醇lOmL，超声处理10分钟，滤过，回收正丁醇 至干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验， 吸取供试品溶液IO^iL和上述对照药材溶液5^iL，分别点于同一硅肢G薄 层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-曱醇-水10°C以下放置12小时的下层溶液 为展开剂，三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：水的体积百分比为 15: 40: 22: 10展开，取出，晾干，喷以浓度为10%的硫酸乙醇溶液， 105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯下检视；供试品色谱 中，不得显与对照药材完全相一致的斑点；
[12] 浸出物含量测定•.（6)取治疗糖尿病的药物3g，精密称定，加70% 乙醇溶液lOOmL，照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，浸出物含量 不得少于34.0%;
[13] 人参皂苷Re含量测定•.（7)取治疗糖尿病的药物4g,精密称定，置 索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流2小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙 醚，加甲醇适量，回流提取至无色，回收甲醇，残渣加水20mL使溶解， 转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取五次，其用量依次为25mL、 20mL、20mL、20mL和15mL,合并提取液，用氨试液洗涤2次，每次 用量为15mL，弃去水层，回收正丁醇至干，残渣加曱醇使溶解，定量转 移至lOmL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取人 参皂苷Re对照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg人参皂苷Re的溶液，作 为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液IOjiL，对照品溶液
[14] 4队、6吣，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水10°C 以下放置12小时的下层溶液为展开剂，三氯甲烷：甲醇：水的体积百分 比为65: 35: 10,展开，取出，晾干，喷以浓度为10%的硫酸乙醇溶液, 105°C加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板， 周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长：^s=525nm，kR==700nm， 测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
[15] (三）方法学考察
[16] 1、 阴性对照试验：按申请号为200310115012. 0的专利处方比例，照 一种治疗糖尿病的药物的制备工艺，制备不含西洋参的阴性对照样品，再 按供试品溶液配制方法制成阴性对照溶液。另取人参皂苷Re对照品，加 甲醇制成每lmL含0.5mg人参皂苷Re的溶液，作为对照品溶液；照薄层 色谱法试验，吸取供试品溶液10pL,对照品溶液4^L、6jiL,分别交叉点 于同一硅肢G薄层板上，以三氯甲烷-曱醇-水10X：以下放置12小时的下 层溶液为展开剂，三氯甲烷：甲醇：水的体积百分比为65 : 35 : 10,展开, 取出，晾干，记录色谱图。结果证明：阴性对照溶液对供试品溶液色谱无 干扰，此色谱条件可作为本品含量测定专属性色谱条件。
[17] 2、 标准曲线制备：取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成0.58mg/mL的 溶液，分别吸取2、4、6、8、lOuL点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲 烷-甲醇-水10X：以下放置12小时的下层溶液为展开剂，三氯曱烷：甲醇： 水的体积百分比为65 : 35 : 10,展开，取出，晾干。喷以浓度为10%的硫 酸乙醇溶液，置105K：加热至斑点清晰，照薄层色谱法进行试验。测得峰 面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，点样量为横坐标制作标准曲线， 见表1及附图1。
[18] 表1 人参皂苷Re现性关系数据
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点样量（Mg) |
1. 04 |
2. 08 |
3.12 4.16 5.20 |
|
积分值 |
7500. 4 |
14136. 9 |
21773.8 29197.8 35447.5 |
[19] 回归方程：y=324. 7+6822. 6X，r=0. 9994。
[20] 结果表明：人参皂苷Re在1.04-5.2jig之间显良好的线性关系，但直 线不通过原点，故采用外标两点法测定含量。
[21] 3、稳定性实验：精密吸取人参皂苷Re对照品溶液3 nL，点于硅胶G 薄层板上，展开，取出，晾干，显色。每隔15min扫描一次，连续扫描5 次，结果5次测定的RSD为0.94%,表明：显色后本品在1小时内测定结 果基本稳定。详见表2。
[22] 表2 稳定性实验数据
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时间（分） |
0 15 |
30 |
45 |
60 |
|
积分值 |
8200. 4 8155. 5 |
8143. 2 |
7984. 2 |
8068. 1 |
[23] 4、精密度实验
[24] (1)板内精密度：精密吸取对照品溶液3^L( 5份），分别点于薄层 板上，展开，取出，晾干，喷以浓度10%的硫酸乙醇溶液，显色，扫描，
[25] 结果见表3。
[26] 表3 精密度实验数据
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1 2 |
3 |
4 |
5 |
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积分值 8068.1 8143.2 |
8201. 3 |
8054. 1 |
8005. 8 |
|
平均值 |
8094. 5 |
|
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RSD (%) |
0. 86 |
|
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结果表明，精密度较高。 |
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(2)板间精密度：分别精密吸取对照品溶液3|iL， |
分别点于不同的 |
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五块板上，展开后扫描测定，结果见表4。 |
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表4 异板精密度实验结果 |
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1 2 |
3 |
4 |
5 |
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积分值 17345.28 18248.50 |
19342. 22 |
18330. 47 |
17947.57 |
|
平均值 |
18242. 81 |
|
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|
RSD (%) |
3.98 |
|
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结果表明，精密度较好。 |
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5、重现性实验：取本品同一批样品（批号 |
:950629 )，按正文含量测 |
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定方法取样5份，测定含量，结果见表5。 |
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表5 重现性实验结果 |
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1 2 |
3 |
4 |
5 |
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含量（mg/g) 0. 670 0. 664 |
0. 684 |
0. 672 |
0.680 |
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14 |
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平均值 0.674
RSD (%) 1. 12
6、回收率实验：
精密称取本品（批号950629,含量0.674mg/g)约2g，另加人参皂苷 Rel. 0-1. 4mg，按正文含量测定方法测定，计算回收率，结果平均回收率
|
为 97. 81%，RSD 为 2. 25%。详见表 6。 表6 回收率实验结果 |
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样品取样量 |
样品含量 |
对照品加入量 |
实测值 |
回收率 |
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(g) |
(mg) |
(mg) |
(mg) |
(%) |
|
2. 1233 |
1.4311 |
1. 00 |
2.4061 |
97. 50 |
|
2.4848 |
1. 6748 |
1. 00 |
2. 6458 |
97. 10 |
|
2. 1922 |
1. 4775 |
1.20 |
2.6710 |
99. 46 |
|
2. 2324 |
1. 5046 |
1. 20 |
2. 6595 |
96. 24 |
|
2. 2511 |
1. 5172 |
1. 40 |
2. 8510 |
95. 27 |
|
2. 2924 |
1. 5451 |
1. 40 |
1. 4179 |
101. 28 |
实验表明，回收率较高。
7、十批样品含量测定：取十批样品，按正文含量测定方法实验，测得
十批样品的平均含量为0.18 mg/粒，按平均含量20%的浮动，规定含量限
度为O.lOmg/粒，十批样品浸出物结测定果见表10。 表10 十批样品含量测定数据
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批号 |
含量（mg/粒） |
批号 |
含量（mg/粒） |
|
20000607 |
0. 21 |
20010306 |
0. 16 |
|
20000608 |
0.23 |
20010812 |
0. 16 |
|
20000609 |
0. 19 |
20010813 |
0. 17 |
|
20010304 |
0.18 |
20010814 |
0.18 |
|
20010305 |
0. 17 |
20020122 |
0. 16 |
成都华西华科研究所研发生产多种糖尿病及并发症早期无创检测诊断系统
研发生产无创糖尿病及并发症早期检测诊断仪
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