成都华西华科研究所分析化学发光诊断技术在临床糖尿病诊断中应用与糖尿病早期无创检测诊断方法

摘要：本研究采用微粒子化学发光诊断技术（CLIA)定量检测胰岛素含量水平，发现TIDM患者服糖后不同时间内丨ns水平 变化不明显，丨ns曲线低平:T2DM患者服糖后胰岛素水平随时相升高，峰值延迟，CLIA法检测丨ns值与临床符合率高。我 们认为，CLIA法优于RIA法，可广泛应用于临床胰岛素功能的检测，定量检测胰岛素水平。

关键词：化学发光免疫法；胰岛素；糖尿病 中图分类号：R562.1+1   文献标识码：B

糖尿病是一组由遗传和环境因素相互作用引起的临床 综合症，而高胰岛素血症和胰岛素抵抗可能是糖尿病、高血 压、冠心病、肥胖、高脂血症等多种疾病的共同发病机制^[1]。 根据患者胰岛素释放实验的结果判定胰岛0细胞的功能， 进而将糖尿病分型及选择恰当的治疗方法，以及快速、准确 地定量检测胰岛素（丨ns)水平是十分重要的。近年来开展的 化学发光免疫法(CLIA)具有快速、精确、试剂无毒等特点， 因而临床应用前景可观^[2]。本文采用微粒子化学发光技术定 量检测胰岛素水平，为糖尿病的临床检验诊断提供新思路。

1       资料与方法 1.1 —般资料

A组：为健康对照组选自我院体检人群25例，男15例， 女10例，年龄22~75岁，平均年龄37.5岁，无糖尿病家族史， 无急、慢性疾病，空腹血糖、胰岛素均在正常范围内；B组: 为临床诊断丨型糖尿病(T1DM)患者22例，男14例，女8例， 年龄8~41岁，平均年龄24岁；C组：为临床诊断丨丨型糖尿病 (T₂DM)患者肥胖型35例，男16例，女19例，年龄33~70岁， 平均年龄54岁。D组：为临床诊断丨丨型糖尿病(T₂DM)患者非肥 胖型18例，男11例，女7例，年龄35~69岁，平均年龄57岁。 1.2方法

1.2.1两组口服75 g葡萄糖粉行OGTT实验，分别于糖负荷 前后30、60、120、180 min采集静脉血3 mL，分离血清。 1.2.2血糖测定使用日本日立公司生产的日立7170型全自 动生化分析仪，试剂为上海复星长征医学科学有限公司生产 的血糖试剂，采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。

1.2.3          Ins测定采用CLIA法测定Ins，使用美国Beckman公 司生产的Access微粒子化学发光分析仪及配套试剂。

1.2.4          CLIA法的测定原理测定丨ns需血清20 pL，加入相应 试剂与磁性微粒子结合，再加入碱性磷酸酶(ALP)标记的相应 的单克隆抗体，经37°C孵育促进抗原抗体结合，用缓冲液清 洗3次，磁性分离去掉未结合物质，加入发光底物PPD，在 ALP作用下，脱去磷酸发射光子，测定其光量子值绘制标准 曲线，并将标本的光量子值与标准曲线对比，计算出丨ns浓度。 1.3统计学方法

本文采用^土^表示各组人群的结果，组间比较用f检查。

2       结果

结果显示正常人空腹丨ns为（10.5±2.1) Uiu/mL，服糖后 迅速升高并在30~60 min间达到峰值，峰值过后丨ns水平逐 渐下降，至餐后120 min接近基础水平。TIDM患者空腹Ins 水平低于正常，葡萄糖刺激后丨ns曲线低平，显示胰岛素缺乏。 肥胖型T2DM患者空腹丨ns水平明显增高，对葡萄糖刺激的 反映良好，峰值于正常人比较迟缓，但峰值水平基本于正常 人组相似。非肥胖型T2DM患者空腹丨ns水平正常或轻微降 低，对葡萄糖刺激的反应不良，且无峰值出现，见表1~3。

表1各组血清血糖mmol/L测定结果

组别	0 min	30 min	60 min	120 min	180 min
A组	4.5±1.1	5.6±1.2	6.2±1.3	4.8±0.9	3.9±0.8
B组	14.6±2.9*	25.9±5.5*	29.2±5.8*	31.8±6.3*	24.2±4.9*
C组	8.6±1.5*	12.3±2.6*	15.8±3.3*	13.4±2.8*	7.8±1.8*
D组	10.3±2.4*	13.1±2.8*	17.2±3.5*	12.8±2.7*	8.8±1.8*
注：B、C、D组与A组比较><0.01
	表2	各组血清丨ns Uiu/mL测定结果(x±s)
组别	0 min	30 min	60 min	120 min	180 min
A组	10.5±2.1	18.2±3.6	38.1±7.6	27.6±5.5	15.6±3.1
B组	2.8±0.6*	5.2±1丫	9.6±1.9*	9.9±2.3*	4.9±0.9*
C组	18.6±3.5*	27.7±5.6*	43.6±8.7*	67.2±11.1	* 38.6±7.6*
D组	6.6±1.3*	8.5±1.7*	14.3±2.8*	11.6±2.3*	8.7±1.7*
注：B、C、D组与A组比较*P<0.01
	表3各组血清Ins基础值、峰值、达峰时间(i：±s)
组别	Ins 基础值(pmol/L)		Ins峰值(pmol/L) Ins达峰时间（min)
A组	10.5±2.1		38.1±7.6		60
B组	2.8±0.6		9.9±2.3	无峰值
C 组	18.6±3.5		67.2±11.1		120
D组	6.6±1.3		14.3±2.8		60

CLIA法是采用微粒子化学发光技术，直接检测发光底 物的光量子值，可排除乳糜血、溶血标本对结果的影响。

3 讨论

CLIA具有高灵敏度、高精密度、高特异性、低交叉污 染率以及试剂有效期长等特点'RIA法优点是敏感可靠， 缺点为试剂受同位素半衰期的限制，效期短有放射性污染， 在试剂的管理上存在诸多麻烦。CLID法依据经典的免疫学 原理，用碱性磷酸酶标记相应单克隆抗体，以PPD为发光 底物，大大提高了检测灵敏度与特异性，避免了 RIA法对 人体的伤害及对环境的污染。且Access微粒子化学发光分 析仪全程自动控制，操作简便，检测速度快，系统误差小， 试剂盒有独特的多层覆盖膜可保证试剂质量，仪器上的试剂 冷藏系统保证了检测过程中的试剂稳定性。

由于高胰岛素血症和胰岛素抵抗可能是糖尿病、高血 压、冠心病、肥胖、高脂血症等多种疾病的共同发病机制， 而在此类患者中又常常出现脂代谢异常，临床标本中多出现 乳糜血，CLIA法恰恰可排除乳糜血、溶血等标本对检测结 果的影响。丨ns浓度测定对糖尿病的临床诊断、分析、治疗、 随访等均具有一定的意义，正常人服糖后30 min左右达到 峰值，峰值后逐渐下降，餐后180 min接近基础水平，TIDM 患者服糖后丨ns水平变化不明显，丨ns曲线低平，显示膜岛 素缺乏。T2SM患者服糖后丨ns水平随时相升高，峰值延迟， 但峰值水平基本与正常人组相似，严重的T2DM患者同时合 并胰岛功能缺陷。本文结果采用CLIA法检测Ins值与临床 符合率高，其变化与临床一致，因此CLIA法优于RIA法， 可广泛应用于临床胰岛功能检测，定量检测丨ns水平。

成都华西华科研究所研发生产多种糖尿病及并发症早期无创检测诊断系统

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