糖尿病相关基因检测与糖尿病早期无创检测诊断方法

糖尿病是一神严重危害人类健康的常见病，其中50%为 n型糖尿病<■目前发病机制尚不清楚,大多认为它的发生是 遗传因素与环境因素共同作用的结果。国内外专家用候选 基因策略和基因组扫描策略，已经发现突变的胰岛索基因、 胰岛素受体基因和线粒体基因等与n型糖尿病的发生有关。 糖尿病属于多基因遗传病,对糖尿病相关基因检S,应进行 综合判躕，才具有十分重要的意义。

1糖尿病相关基因的突变

1.1线粒体基因线粒体DNA(mtDNA)的tRNALeM(uuR) 基因的二氢尿嘧啶环上核苷酸IH3343A-G突变和线粒体 DNA10.4kb大片段缺失可引起糖尿病并伴有神经性耳聋。 由于rt3243处于促进转录终止的蛋白质因子的结合位点，因 此这一突变既干扰tRNALeu(UUR)的合成，也影响转录终止 因子的结合，导致线粒体蛋白质合成缺陷。线粒体DNANDI 基因H3316G—A突变导致NDI亚基中相应部位的非极性氰 基酸突变为极性的苏S酸,影响线粒体酶的活性，也是导致 n型糖尿病的发病原因之一 1.2饋岛素基因

■人姨岛索（INS)基因位于第丨1号染色体短膂，全长 I355bp,含3个外显子。第1号外显子编码成熟mRNA上的 核糖体结合位点，第2号外显子编码起始密码子，信号肽、B 链和C链，第3号外显子编码A链。胰岛*基因中Ais65Ki«、 Ai*65Oeu和HislOOASP等点突变可导致血中胰岛素原不能 转换为胰岛素而导致髙胰岛素原血症。另外A链S基酸 ■ Vail3Leu，B链H»24Ser和Phe25Leu等突变导致分泌异常结构 的胰岛素分子，影响它与受体的结合力，使胰岛素生物活性 降低。

1.3 K岛索受体基因

.胰岛索受体0NSR)基因突变使胰岛素受体异常是目前 比较肯定的n型糖尿病的致病原因之一。胰岛素受体基因 的多个外显子中有无义突变其中第20号外显子中 Aigin4Gtn突变位于酪氣酸激酶作用区内，影响受体细胞内

®基的结构，是弓丨起遗传性胰岛索受体抵抗的主要原因。

2相关基因检澜

2.1线粒休基因m3243A—~G和nt3316G-»A突变的检测 从外周血提取出线粒体DNA后，用PCK技术扩增包含 点突变的特异片段，再以常用的点突变检测技术分析扩增产 物。扩增所用的上游引物序列为5’ - AGGACAAGA- GAAATAAGGCC - 3 ’ t 下游 引物为 ： 5, _ CACdTCGCGC- Cnrc〇GrA_3\r增片段长度为 2941^ nt3243A--G 突变 可产生一个ApoA【酶切位点和一个HaeHl酶切位点,用这两 种酶同时水解PCR产物，若被检片段数目和大小发生改变， 说明扩增产物中含有突变点;若被检片段长度不变，则说明 产物中无相应突变。m3316G-A突变可使相应序列消失一 个HaeII酶切位点，因此用II酶水解PCR产物,根据片 段数目和大小能判断被检样本是否发生nt33]6G~*A突变。 2.2其它基因的突变检测

对于其它相关基因的突变检测，可对所有外显子逐个筛 査，寻找点突变，也可对一些已知突变进行检测。

糖尿病属于多基因遗传病，有家族聚集倾向，患者亲属 的发病率离于群体发病率,但无明显的遗传方式。多基因遗 传病发病风险的估计，必须考虑到患者一级亲属再发风险与 群体发病率的关系;家庭中患病人数与再发风险的关系;发 病率有性别差异时与再发风险的关系等上述各种情况，应进 行综合判断，对糖尿病相关基因检测,才具有十分重要的意 义。

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