成都华西华科研究所分析骨形态计量学与QCT骨密度软件体模检测

骨活检技术（Bone biopsy}

近三十年来，骨活检作为一种研究手段，已被广泛运 用于临床和动物实验研究中。除静态的钳织学信总外， 荧光双标记能对两个不M时间的组织矿化进行定位，从而提供关于骨形成的动态信息（图15-5)。矿物沉积率 是一个关键的动态指标，用来测敢骨形成率，由双标记线 之间的距离决定。

在临床研究中.髂骨足最常用的活检部位。当然，髂 骨活检也冇缺点：如仅能在髂嵴处取、标本的形态差异 大、皮质骨有限、实验过程较繁琐、病人有一定痛苦等。

阁丨5-5在骨表面可见明显的荧光双柝记（四环索和钙黄 缄家）。未染色，200倍

1.  四环素标记在人类研究中，四环素类药物是唯 一适用的荧光标记药物^[8]。在荧光显微镜中，通过 350m«波长荧光的激发后能出现明亮的荧光。最常用的 为盐酸四环素（250mg,tid or qid),药物会沉积在持续矿 化的部位。标记的明亮度由药物的血浆浓度决定，而浓 度由剂ft决定。双标记过程包括连续服药儿天，休息更 长一段时间后第二次服药，在最后一次服药后5〜14天 活检，能产生良好的标记结果。这种方法缩写为3-14 -3:5(图丨5-6)，包括3天服药，停14天，再服药3天， 5天后活检。二次®药时间中点之间的间隔称为标记时 间，这个数值被用来计算矿物沉枳率。图丨5-6标示的

1.  14-3:5方案有17天的标记间隔时间。如使用其他 标i己物时，为避免标记逃逸现象，间隔时间也不应超过 17天【，】〇

3天服药 丨4天停药  3天服药5天停药间隔时间14天

图15-6在活检前口服四环素，按3-14-3: 5方案进行 双标记。标记间隔时间为二次纶药期中点之间的天数

2•活检使用内径不少于7.5mm的环锯能获得合 适的标本。髂骨活检为门诊小手术。患者以仰卧位躺于 手术台上。活检部位在大约髂前上_后下2.5cm。W部 麻醉后做2cm皮肤切口并钝性分离至卄腴。插人环锯取 出一小块骨.包括双侧的骨皮质和其中的松质骨小梁。 缺损处用2小条明胶海棉压迫止血，关闭切口，压迫包 扎。假如同一患者做第二次活检时，应在对側同一解剖 部位采取。最多只能取2次，每边各一次。上海笫二医 科大学附《笫九人民医院采用特制活检针经皮穿剌活检技术，创伤更小，不做切口，同样获得较好结果。

[16]    标本处理

(1>固定标本取下后立刻放在盛有70%酒稱的带 盖瓶子内。70%酒铕不仅能提供充足的固定，也有助于 在室温下长期保存。用洒梢装满放标本的荇器（去除空 气）是为了在处理时保护好标本。进行抗酒石酸酸性磷 酸酶染色的标本，在低温下进行固定。不推荐用磷酸盐 缓冲的描尔马林固定.因为它能溶解骨矿物质，使四环素 标记欠佳。可以在固定液中溶解染色剂使标本块若色。 这对于区分组织切片时的人为裂纹非常重要。

[32]    脱水，去脂，包埋为了进行商质》的包埋，避免 产生组织伪相，脱水和去脂时X缓慢、仔细、完全。在梯 度酒精脱水后浸丙酮中，甲基甲基丙烯酸酯内包埋。

(3>切片和染色修整组织块后用装有炭化钨钢刀 的切片机切片。每隔200/xm分别进行5〜7_Mm的切片和 15〜20pm的切片，保证所做的切片反映组织块不同层次 的结构。5~7；xm的切片可进行Goldner染色或甲苯胺 蓝染色，15〜20_Mm的切片不染色，分别在荧光和偏光显 微镜下观察四环素标记衣面和胶原结构（判断是板层钟 还是编织骨）。用甲苯胺蓝染色测定荦庳.用Goldner染 色切片测M任何其他参数。

二、测置方法（Measurement methods}

形态计M是一种基于体视学原理，从二维切片上推 导三维结构的--种方法。

早期是利用网格法进行人工测S,现在已有专门的 软件可以用来进行计算机的辅助测最和分析^¹。首先 测慑有关面积、长度、距离、数目的一些基本数据，再依据 美国骨矿协会对骨形态计里参数的定义进行计算^;u、主 要有反映卄量、骨结构与骨代谢的的一些参数。

(2)    反映骨最的参数皮质骨宽度（Ct. Wi),也可以 表示为皮貭骨厚度(Ct.Th),以实际测最数据表示。壁厚 (W.Th)是静止骨小梁表面（没有类骨质和吸收陷窝）和 水门汀线的平均距离（图15-7)。此参数常被用来计箅 形成周期。骨小梁体积(BV/TV)是小梁骨面积与组织总 面积（包括骨髓与小梁骨 > 之比，农示为百分数。

图丨5-7骨壁序度。不脫钙骨切片，甲苯胺蓝染色。丨〇〇倍

2.  反映骨M微结构的参数小梁连接性（Tnibecular connectivity)这一•槪念表述广骨小梁之间的连接程度。 连接性的丧失可能是骨过度（即与骨M的丢失不成比例） 脆弱的原因。P_arfiu^m描述了骨小梁厚度[Tb. Th = 2/ (BS/BV)]、骨小梁数目[Tb. N= (BV/TV> /Tb.Th]、骨 小梁间距[Tb. Sp =丨/Tb. N - Tb. Th]等的计算方法。这 些计算和测埴已经成为一个完整的髂竹活检组织形态测 燉的一部分。衡M骨小梁连接性的其他指标包括：结点 和游离末端的比例^[W1、ffi体积M和小梁骨结构因子 (TBP〇【_⁴¹。

还有另外-种方法分析表面染色的序切片（三维组 织形态测定），以使切片时产生的人为断端着色，但真正 的末端不着色。在Aaron等对骨质疏松症妇女的研究 中，这种方法能发现并发或不并发脊柱卄折的病人骨结 构明显的不同^35],但用传统的组织形态方法测定则无 区别^[161。

3.  反映骨形成和吸收的叁数类针质表面（OS/BS) 是类骨质（不竹有无成卄细胞）长度占骨小梁周长的比 率。类骨质厚度（O.Th)是覆盖在#小梁表闹的类骨质 的平均厚度。侵蚀表面（ES/BS)是吸收陷窝（不忏有无破 骨细胞）占据的骨小梁表面的比率。成骨细胞表曲（Ob. S/BS)是成骨细胞占骨小梁衣面的百分比。破骨细胞表 面(Oc.S/BS)是破骨细胞占骨小梁衣面的百分比。

矿化衣面（MS/BS)垃标记的骨小梁矿化表面占总骨 小梁表面的百分比。它包括单标计表面和双标计表面。 MS/BS可被用于计算骨形成速率、骨形成时间和各种矿 化延迟时间。

矿物沉积率（MAR)是骨小梁表曲矿化层形成的速 度。它是由标记间距离除以标记间隔时间得到的。测ft 2条标id中点之间的距离.再用tt/4修正，或用经验值 1.199来修正它。这是根据小梁骨的各向异性而来

的:^,7】。形成周期（FP)是完成一个新的小梁hSU所需要的 平均时间，等于MAR/W.Th。F-S/BS和OS/BS的比率乘 以FP可得到吸收周期（RP>。矿化延迟时间（Mh)是类骨质形成和矿化间的时间， 等于0• Th/MAK。它还可以用标记表面（矿化）占类竹 质表面的百分比（MS/OS)来校正。W此，Mlt = O. Th/ MAR*MS/OS。Mlt能用来发现矿化的缺陷，如原发性 维生家D缺乏病。

骨形成率（BFR/BV，BFR/BS):两个最有用的骨形成 率表达式一是BFR/BV，为每年形成的小梁骨体积占总 钟体积的百分比，二是BFR/BS，每年单位竹小梁表面上 形成的小梁竹体枳。
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